养好NK-92自然杀伤细胞的“武功秘籍！-技术前沿-资讯-生物在线

养好NK-92自然杀伤细胞的“武功秘籍！

作者：上海中乔新舟生物科技有限公司 2022-10-14T13:45 (访问量:16101)

NK-92细胞是一种白细胞介素-2 (IL-2) 依赖性自然杀伤细胞系， 1992年建立于一名患有快速进展性非霍奇金淋巴瘤的 50 岁白人男性的外周血单核细胞。NK-92细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。几十年来，它在癌症治疗、免疫学和毒理学等研究领域中发挥着重要作用。

然而，作为一种悬浮生长且有着诸多特性的细胞系，想养好NK-92细胞就需要注意很多小的细节，否则很可能耗费大量时间却发现它“一点不给面子”。以下几招是“驯服”它的“秘籍‘，不要错过哦！

白细胞介素-2 (IL-2)质量

白细胞介素-2 (IL-2)是配制NK-92细胞完全培养基的必要组成成分。NK-92细胞的增殖依赖高质量的IL-2，如果IL-2的质量不好或者浓度不够，会让细胞增殖受限甚至完全凋亡，这一点是重中之重哦！除此之外，对完全培养基进行分装也是必要的，可以减少IL-2及其它有效成分的降解。

秘密武器--沉降法

NK-92是种非常“团结“的细胞，它们成长过程中需要”互帮互助“，一旦细胞个体脱离”团体“，将会停止增殖直至死亡。所以，在换液、传代及冻存过程中，不建议使用离心的方法去除旧的培养基（离心重悬过程会打散部分细胞团）。建议在换液分瓶或者冻存时采用”沉降法“—将培养基连同细胞团轻柔转移至一个15ML尖底离心管中，静置10-20分钟，待细胞团沉降至离心管底部后小心去除旧的培养基（在不吸到细胞团的情况下尽量多地去除旧培养基）。如此操作，可以最大限度保留细胞团，维持细胞活力。

换液频率

复苏初期细胞团小而少，活力较差。因此，避免频繁换液对细胞恢复活力是很重要的。在复苏后的一周内只需换1-2次液，同样需采用上文提到的“沉降法“，除此之外，第一次换液可”半换液“—即细胞沉降后保留靠近底部的1/2培养基，补加等量新鲜培养基即可。待细胞活力恢复，增殖旺盛时，视细胞密度及培养基颜色每2-3天换液一次。

传代及冻存操作要点

传代及冻存操作需要细胞处在增殖旺盛的“对数生长期“，并且达到一定密度。对于NK-92这种聚团悬浮细胞来说，密度包含了两个方面--细胞团在培养基中的密度和细胞团中聚集个体数量的多少。

如果细胞团数量不多，但是细胞团本身比较大（当在镜下观察到细胞团中心发暗），既不适合传代又必须处理：可在沉降重悬后轻轻吹打细胞团2-3次，将大的细胞团分散呈小的细胞团以使细胞能正常获取营养继续增殖。如果忽略该操作，将可能导致细胞团短时间内解离，细胞大面积死亡。

如果同时满足以上关于密度的两方面要求，即可进行传代或冻存：沉降细胞后轻轻吹打细胞团2-3次后分瓶或加入冻存液重悬、冻存。

细胞碎片很多怎么办？

由于细胞特性，细胞碎片的出现在培养NK-92的过程中是常见且正常的，数量少时不会影响细胞增殖。如果数量非常多，使用咱们的“秘密武器“--沉降法进行一次换液就可以啦！大量碎片会悬浮在上清中被去除掉。

给大家推荐一下NK-92的完全培养基：货号：ZQ-801，主要成分：MEM α基础培养基；12.5%heat-inactivated horse serum，12.5%FBS（AU0600），1%PS，0.2mMinositol，0.1mM β-Mer，0.02mMfolic acid，100-200U/mL recombinant IL-2。

以上就是养好NK-92的“武功秘籍‘啦！希望大家都能养出”白白胖胖“的NK-92细胞哦！

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